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- 細(xì)胞培養(yǎng)的原理和步驟
- 點(diǎn)擊次數(shù)：533 發(fā)布時間：【2023-09-20】
細(xì)胞培養(yǎng)：
細(xì)胞培養(yǎng)是指體外模擬體內(nèi)需要的生長條件（溫度，營養(yǎng)等），然后加上一些處理條件，比如做藥物篩選，就可以做抗性基因的表達(dá)的篩選，比如還可以測定某個基因敲低或是過表達(dá)的產(chǎn)物，這個當(dāng)然要結(jié)合WB來看最后基因的表達(dá)產(chǎn)物是否升高哦，細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用還有很多，歡迎大家在后臺留言。
細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理：細(xì)胞傳代（生存空間和營養(yǎng)不足，長得太密，代謝廢物太多，要洗洗，同時也要分離出一部分細(xì)胞，要加入新的培養(yǎng)液）換液（生存空間和營養(yǎng)剩余，但是代謝廢物太多，要洗洗，要吃飯，才能長好，所以要洗和加入新鮮培養(yǎng)基）凍存（太多了，先存起來，液氮里面里就是低溫，保存能量，活得久）
復(fù)蘇（解凍，恢復(fù)吃飯的能力，恢復(fù)生長）
胞培養(yǎng)的基本步驟（一定要明白每個步驟的意義和目的）：
01細(xì)胞傳代（貼壁細(xì)胞）：
試劑：PBS（PBS緩沖液），胰酶，含血清的培養(yǎng)基；
流程：顯微鏡下看一看培養(yǎng)皿里的細(xì)胞多不多，太多（80%~90%）會導(dǎo)致代謝廢物很多，先吸掉廢液，再用PBS洗一洗，同時太多會導(dǎo)致細(xì)胞黏在一起，這時候就需要加點(diǎn)胰酶消除它們之間的粘性，是否消除完，在顯微鏡下看一看，看完加入適宜的含血清的培養(yǎng)基，中和一下胰酶，這叫吹打，除此之外，細(xì)胞太多了，把一部分細(xì)胞移出來，加入適量的培養(yǎng)基放入孵箱繼續(xù)培養(yǎng)，這叫傳代。
02細(xì)胞換液：
試劑：PBS，含血清的培養(yǎng)基；
流程：先吸掉代謝廢物（即細(xì)胞瓶中的培養(yǎng)液），再用PBS洗一洗，由于細(xì)胞長得不是很多，細(xì)胞之間沒有黏在一起，因此不需要加入胰酶來消除它們之間的粘性。由于細(xì)胞要吃飯，加入新鮮的含血清的培養(yǎng)基，最后放到孵箱里面進(jìn)行培養(yǎng)。
03細(xì)胞凍存：
試劑：凍存液，PBS，胰酶，含血清的培養(yǎng)基；
流程：要凍存，先配置凍存液，凍存液包含了：DMSO：防止在低溫（零度以下至-196℃）保存細(xì)胞時，細(xì)胞內(nèi)液會形成冰晶，滲透壓會發(fā)生改變，細(xì)胞結(jié)構(gòu)會出現(xiàn)紊亂，會導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)損傷。凍存液制備時，一般需與血清一起配置：因?yàn)閮烧呋ト跁r，會散發(fā)熱量，所以凍存液需提前制備。
因為細(xì)胞太多了，需要凍存，所以要先看一看，吸一吸，洗一洗，分一分，中和一下，吹打制成細(xì)胞懸液，離心，吸掉上清液，加入凍存液，輕輕吹吸均勻，每管等量1ml裝入凍存管，4℃20min,-20℃30min,-80℃過夜，最后放入液氮罐。
04細(xì)胞復(fù)蘇：
試劑：含血清的培養(yǎng)基；
流程：從液氮中取出凍存管，迅速（小于3min）置于37℃水浴鍋中，解凍時，邊晃動邊觀察，當(dāng)看到只有一小塊冰存在時，即可從水浴鍋中取出，打開凍存管，迅速將細(xì)胞懸液吸到離心管中，輕輕混勻，1000r/min,離心五分鐘，吸掉上清液，沉淀中加入適量培養(yǎng)液，放入孵箱中，培養(yǎng)。還有就是：復(fù)蘇的細(xì)胞，需要在24小時后，換一次培養(yǎng)液
